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实验原理
分枝杆菌一般不易着色，经加温或延长染色时间而着色后，能抵抗酸酒精的脱色作用，故又称抗酸杆菌。对人有致病性的分枝杆菌主要是结核分枝杆菌和麻风分枝杆菌。
实验步骤
1. 取痰中粘稠脓性或干酪样带血丝部分涂片（略厚），自然干燥后，通过火焰固定，于涂片外周用蜡笔划圆。
2. 用木夹持玻片，滴加石炭酸复红染液，以盖满标本面为度，在火焰高处徐徐加温至冒蒸气，并维持5分钟（注意切勿让染液沸腾或煮干），当染液蒸发减少时，需再加染液补充。
3. 待标本片冷却后水洗。
4. 用3%盐酸酒精脱色，至无红色染液流下为止。
5. 水洗后，用吕氏美蓝复染1 min，水洗，吸干，镜检。抗酸杆菌呈红色，背景及非抗酸菌呈蓝色。
显微镜观察的话最好的方法就是染色观察了，对于鉴别一些基本特性的细菌很有帮助。
基本步骤是：涂片用的载玻片需用清洁液洗净、擦干、不留油质，否则培养物不能均匀地推开。被检材料如果是肉汤培养物，用铂金耳环取一滴，均匀涂抹于载玻片上，涂抹的范围约有手指甲大即可。随后，在酒精灯火焰上加热使之固定（即火焰固定）；被检材料如果是固体培养物，先滴一滴水（常用生理盐水）于载玻片上，用铂金耳环取少许培养物，在水滴中混匀，培养物不宜太多，菌体看不清楚。脓汁、淋巴液、乳汁也按同样方法制备抹片。血液和病变组织，直接涂抹在载玻片上，组织抹片也不能太厚，否则看不见细菌，细菌培养物抹片用火焰固定，组织抹片常用甲醇或甲醛固定。下面是几种常用的染色法：
(1) 革兰氏染色法：
① 在已干燥、固定好的抹片上，滴加草酸铵结晶紫染色液，经1－2分钟，水洗；
② 加革兰氏碘溶液于抹片上，作用1－3分钟，水洗；
③ 加95%的酒精于抹片上脱色，约30秒－1分钟，水洗；
④ 加稀释石炭酸复红（或沙黄水溶液）复染10－30小时，水洗；
⑤ 吸干或自然干燥，镜检。革兰氏阳性菌呈蓝紫色，革兰氏阴性菌呈红色。
(2) 美蓝染色法：在已干燥、固定好的抹片上，滴加适量的（足够覆盖涂抹点即可）美蓝染色液，经1－2分钟，水洗，干燥（可用吸水纸吸干，或自然干燥，但不能烤干），镜检。荚膜呈红色，菌体呈蓝色，异染颗粒呈淡紫红色。
(3) 萋－尼（Ziehl － Neelsen）氏抗酸染色法：首先在已干燥、固定好的抹片上，滴加较多量的石炭酸复红染色液，在玻片下以酒精灯火焰微微加热至发生蒸气为度（不要煮沸），维持微微发生蒸气，经3－5分钟，水洗。然后用3％盐酸酒精脱色，至标本无色脱出为止，充分水洗。再用碱性美蓝染色液复染约1分钟，水洗。最后吸干、镜检。抗酸性细菌呈红色，非抗酸性细菌呈蓝色。
(4) 姬姆萨氏染色法：于5ml新煮过的中性蒸馏水中滴加5－10滴姬姆萨氏染液原液，即成为常用的姬姆萨染色液。抹片经甲醇固定（一般需2－3分钟），干燥后，在其上滴加足量染色液，或将抹片浸入盛有染色液的染色缸中，染色30分钟，或者数小时至24小时，取出水洗，吸干或烘干，镜检。荚膜呈淡紫色，菌体呈蓝色，视野常呈红色。
(5) 鞭毛染色法
刘荣标氏鞭毛染色法：
染色液：甲液：5％碳酸溶液 10ml
鞣酸粉末2g
饱和钾明矾水溶液10ml
乙液：饱和结晶紫或龙胆紫酒精溶液
用时取甲液10份，乙液1份，混合后在冰箱中可保存7个月。在干燥、固定好的抹片上，滴加上述混合液，在室温中染色2－3分钟，水洗，干后镜检。菌体和鞭毛均呈紫色。
(6) 芽胞染色法
复红、美蓝染色法：抹片经火焰固定后，滴加石炭酸复红液于片上，加热至产生蒸气，经2－5分钟，水洗，以5％醋酸褪色，至淡红色为止，水洗；以骆氏美蓝液复染半分钟，水洗；吸干或烘干，镜检。菌体为蓝色，芽胞呈红色。
孔雀绿、沙黄染色法：抹片经火焰固定后，滴加5%孔雀绿水溶液于其上，加热30－60秒，使生蒸气3－4次，水洗半分钟，以0.5％沙黄水溶液复染半分钟；水洗，吸干，镜检。菌体呈红色，芽胞呈绿色（酸处理过的玻片，可防止绿色褪失）。
希望这些对你有用！
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